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上海莼試生物技術有限公司
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詳細的原代細胞培養經驗

時間:2017/9/28閱讀:334
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01原代細胞啟蒙老師的重要性
一般進實驗室都有師兄師姐帶著做,他們就是你做細胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細節、理論講解就成了你操作的準則,如營養液、細胞瓶的擺放位置;滅菌處理程序;開蓋手法;細胞吹打手法等等。要學會他們的正確操作,在*次的時候就要重視。

02
像養孩子一樣養細胞
細胞真的很脆弱,每天都去看看它,以防止出現培養箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異常現象,也好及時解決這些意外,避免重復實驗帶來的更大痛苦。

03
好細胞要及時保種
細胞要分批傳代,這樣即使有一批出了問題,還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。但這是我血的教訓,有一次細胞污染了,全軍覆沒。當時可后悔沒有保種。

04每種細胞都有自己的特性,要區別對待
細胞跟人一樣,不同的細胞,培養特性是不一樣的。培養過程中要細細體會。不同細胞株使用不同的培養基和血清。

05
無菌意識要強
實驗進行前,超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌,以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后,才開始實驗操作。

每次操作只處理一株細胞株,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。

無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區域,一般勿在邊緣區域操作。

小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約 45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

06選擇正確的培養基 
不同的原代細胞可能培養基不同,甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養基成分也是可能不同的。如我當時培養神經干細胞,有文獻就選用 neurobase 培養基,而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而這種培養基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養基。
產品名稱:    Anti-BrdU    規格:    0.1ml    溴脫氧尿苷單克隆抗體
產品名稱:    Anti-BrdU       規格:     0.1ml    溴脫氧尿苷抗體
產品名稱:    Anti-Brg1    規格:    0.1ml    新的抑癌基因Brg1抗體
產品名稱:    Anti-Brucella    規格:    0.1ml    抗布魯氏菌抗體
產品名稱:    Anti-BSEP    規格:    0.1ml    膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體
產品名稱:    Anti-BTG2/TIS21      規格:     0.1ml    B細胞遷移基因2抗體
產品名稱:    Anti-BTK      規格:     0.1ml    鼠抗人非受體型酪氨酸激酶BTK單克隆抗體
產品名稱:    Anti-C    規格:    0.1ml    過敏毒素C(補體C)抗體
產品名稱:    Anti-C      規格:     0.2ml    過敏毒素C抗體
產品名稱:    Anti-CA Ⅱ    規格:    0.1ml    碳酸酐酶2抗體

原代細胞

 

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