小鼠ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)（elisa試劑盒檢測方法）是20世紀(jì)60年代末期發(fā)展起來的一種免疫學(xué)檢測方法，是目前Z廣泛應(yīng)用的標(biāo)記免疫技術(shù)。1966年Nakene和Pierce共同發(fā)表了《酶標(biāo)抗體：制備和抗原定位中的應(yīng)用》，首先提出了酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA試劑盒檢測方法）的基本原理。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表《ELISA KIT方法吸附試驗(yàn)測定IgG含量》一文，使酶聯(lián)免疫（ELISA試劑盒檢測）技術(shù)成為一種實(shí)用的檢測液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的方法。目前酶聯(lián)免疫（ELISA試劑盒）檢測技術(shù)已廣泛用于免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)等。由于其具有靈敏度高、試劑穩(wěn)定、設(shè)備簡單、操作安全等優(yōu)點(diǎn)，近幾年也將其應(yīng)用到食品領(lǐng)域中來檢測某些食品中的生理活性物質(zhì)。

一、基本概念

1、免疫：籠統(tǒng)地概括起來，免疫就是人和動物機(jī)體防御、排除外來物質(zhì)（異物）進(jìn)人體內(nèi)，同時識別和清除體內(nèi)死亡、變性物質(zhì)和平定體內(nèi)叛亂分子突變細(xì)胞，以保護(hù)和穩(wěn)定自身的防護(hù)機(jī)制。

2、抗原：抗原是指那些能夠誘導(dǎo)機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗體和致敏效應(yīng)淋巴細(xì)胞，并在體內(nèi)外與之特異性結(jié)合，發(fā)生免疫反應(yīng)的物質(zhì)。

3、抗體：是能與相應(yīng)的抗原專一性結(jié)合的蛋白質(zhì)分子，和機(jī)體其他生物大分子一樣是細(xì)胞的產(chǎn)物，分泌到體液中或表現(xiàn)在細(xì)胞表面上。

4、抗原、抗體反應(yīng)：抗原和抗體在體外的反應(yīng)亦稱血清學(xué)反應(yīng)。這類反應(yīng)可借助免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。

二、抗體定量檢測方法及其原理

定量分析抗體的常用方法有擴(kuò)散法、酶聯(lián)免疫吸附法和火箭免疫電泳法等。

1、免疫擴(kuò)散法

a、單向免疫擴(kuò)散法

原理：將待檢抗原滴加于含相應(yīng)抗體的瓊脂板小孔中，經(jīng)一定時間擴(kuò)散后。形成乳白色的沉淀壞，在一定濃度范圍內(nèi)，抗原的含量與沉淀壞直徑成正比。可以先用己知不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)測試樣品沉淀環(huán)直徑的大小，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品中抗原的相應(yīng)含量。

b、雙向免疫擴(kuò)散法

原理：可溶性抗原與已知可溶性抗體分別加入相鄰的瓊脂糖凝膠板上的小孔內(nèi)，在電解質(zhì)存在下讓它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在Z適當(dāng)比例處相遇時，即形成一條清晰的沉淀線。根據(jù)稀釋度與已知標(biāo)準(zhǔn)品稀釋度之比，可計算出抗體含量。

2、火箭免疫電泳法

原理：抗原在電場力的作用下向前移動，當(dāng)抗原在通過含有一定量單一抗體的瓊脂凝膠時，即形成抗原抗體復(fù)合物，比例合適即沉淀下來。因抗體遷移率低，而抗原隨電泳向前移動，因而使抗原、抗體形成圓錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi)，峰的高度與抗原的濃度呈正比。