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草地夜蛾卵巢細胞;Sf9復蘇操作要點

時間:2021/8/3閱讀:444
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草地夜蛾卵巢細胞;Sf9復蘇操作要點:

1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

mOPC, 小鼠少突膠質前體細胞

MA, 小鼠星形膠質細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

小鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

MM, 小鼠小膠質細胞

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞

MN-c, 小鼠皮質神經元

 細胞名稱

人絨毛膜毛細血管內皮細胞

人羊膜上皮細胞

人絨毛間充質成纖維細胞

人羊膜間充質基質細胞

人絨毛膜間充質基質細胞

 正常細胞

NRK-52E,大鼠腎細胞

H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源)

C2C12, 小鼠肌原細胞

NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系

大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)

HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系


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