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人DNA甲基轉移酶1ELISA檢測試劑盒?操作步驟

時間:2021/9/28閱讀:306
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人DNA甲基轉移酶1ELISA檢測試劑盒操作步驟:


1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。

小鼠垂體瘤細胞(分泌促生長激素分泌激素);AtT-20

小鼠小膠質細胞;BV2

小鼠骨髓瘤細胞;Fox-NY

小鼠胚胎成纖維細胞;MEF

小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞);YAC-1

野生型人c-kit受體細胞株;A7d

小鼠原B細胞株;BaF3

小鼠腦瘤細胞;BC3H1

小鼠成肌細胞;C2C12

小鼠肝癌細胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]

小鼠肥大細胞瘤細胞;P815

小鼠胚胎成纖維細胞;3T6-Swiss albino

小鼠胚胎成纖維細胞;C3H 10T1/2 2A6

小鼠樹突狀細胞肉瘤細胞;DCS

小鼠淋巴瘤細胞;EL4

小鼠前胃癌細胞;MFC

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞;RAW 264.7 [RAW264.7

小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1

小鼠乳腺癌細胞;CCC-Ca761-03

小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3

小鼠淋巴細胞白血病;L1210

小鼠肺腺癌細胞系;LA795

C3H/An小鼠結締組織細胞(L929-TK-);LTK-

小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH2

小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH3

倉鼠/小鼠雜交瘤細胞;145-2C11

小鼠黑色素瘤細胞;B16

小鼠T淋巴細胞;Cl.Ly1+2-/9

小鼠單核巨噬細胞;J774A.1

小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-1

綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞;MFC-GFP

小鼠腎足細胞;Mouse podocyte

小鼠淋巴瘤細胞;P388D1(IL-1)

小鼠子宮頸癌細胞;U14

綠色熒光蛋白標記小鼠子宮頸癌細胞;U14-GFP

小鼠漿細胞瘤;MPC-11

小鼠胚胎成纖維細胞;PA317

轉PYTL基因小鼠睪丸支持細胞;15P-1


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