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小鼠神經(jīng)干細胞培養(yǎng)操作方法

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復(fù)蘇: 
1,將小鼠神經(jīng)干細胞凍存管從液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁,防止污染。 ,
2,將凍存管內(nèi)細胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4 ml小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液的15 ml離心管內(nèi),以1000 rpm,離心5 min。 
3,離心后將上清液吸除,另加入新鮮的小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液2 ml,吹打懸浮。 
4,輕輕吹打,制成單細胞懸液,盡量避免氣泡。 
5,按照小鼠神經(jīng)干細胞說明書中建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移至一個T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),加入培養(yǎng)液6 ml。 
6,放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 
復(fù)蘇第二天觀察,如死細胞較多,更換新鮮的小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液,可以使細胞生長的更好。 
傳代: 
1,待細胞長到80%滿時進行傳代,一般2-3天,具體視細胞生長情況。
2,吸除廢液。 
3,用PBS(不含鈣鎂離子)輕輕沖洗一遍。
4,加入1-2 ml的0.05%胰酶(含EDTA)至培養(yǎng)瓶,輕輕晃動,使胰酶覆蓋底面,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)消化細胞。 
5,在顯微鏡下觀察,直至細胞層全部脫落(一般需要5-15 min)。
6,加2 ml小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液終止消化。 
7,1000 rpm離心5 min,去上清,加入小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液2 ml。 
8,多次輕輕吹打細胞,制成單細胞懸液。 
9,按照1:4-1:10的比例進行傳代。 
10,放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 
凍存: 
1,按傳代的方法將細胞消化下來,制成細胞懸液。
2,以1000 rpm,離心5 min,棄上清,逐滴加入已經(jīng)預(yù)冷的凍存液,懸浮細胞。 
3,按每支凍存管內(nèi)加入500 ml細胞懸液分裝到凍存管內(nèi),標記細胞名稱、代數(shù)、凍存日期等基本信息。 ,4,將凍存管置于程序降溫盒內(nèi),-80℃過夜,轉(zhuǎn)入液氮。 
凍存液配方: 
小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液 90%,DMSO 10% 

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