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人正常組織細(xì)胞轉(zhuǎn)化如何調(diào)控?

時間:2018-2-9閱讀:186
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人正常組織細(xì)胞該研究旨在探討Hedgehog-Gli1(HH)信號在腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化(epithelial-mes-enchymal transition, EMT)和膠原累積中的作用及與TGF-β1信號的對話機制。該實驗通過體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E, 以溶劑作為對照組, 以1~50 ng/mL重組蛋白sonic hedgehog(Shh)或5 ng/mL TGF-β1作為誘導(dǎo)組, 以加入或不加入HH信號特異性阻斷劑環(huán)靶明(cyclopamine, Cyp)5 μmol/L為干預(yù)組。細(xì)胞培養(yǎng)24 h, 采用ELISA、qRT-PCR、免疫細(xì)胞熒光染色和Western blot等方法檢測HH信號相關(guān)分子(Ptch1、Smo和Gli1)、TGF-β1、EMT相關(guān)分子(Rac1蛋白、肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA和上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin)、III型膠原mRNA或蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn), 外源性Shh上調(diào)Smo和Gli1表達(dá), 抑制Ptch1表達(dá), 繼而激活HH信號; HH信號活化抑制腎小管上皮細(xì)胞E-cadherin的表達(dá), 上調(diào)α-SMA、III型膠原和TGF-β1的表達(dá)。環(huán)靶明干預(yù)后, Smo表達(dá)下調(diào), 進(jìn)而抑制HH信號、EMT和膠原累積, 并下調(diào)TGF-β1的表達(dá)。應(yīng)用TGF-β1誘導(dǎo)小管上皮細(xì)胞EMT, 同時也上調(diào)HH信號分子Smo和Gli1的表達(dá), 下調(diào)Ptch1的表達(dá), 提示TGF-β1可誘導(dǎo)HH信號活化。綜上所述,HH信號和TGF-β1均參與了腎小管上皮細(xì)胞EMT和膠原累積過程。HH信號活化可促進(jìn)TGF-β1的表達(dá), 同時TGF-β1能激活HH信號, 推測TGF-β1與HH信號可能存在交叉對話以調(diào)控EMT和膠原累積。

Hedgehog-Gli1(HH)信號通路是一條進(jìn)化保守的、與干細(xì)胞增殖分化密切相關(guān)的信號通路。正常表達(dá)的HH信號在人類發(fā)育過程中起著重要作用, 但持續(xù)異常激活的HH信號可導(dǎo)致胰腺癌和胃癌等多種腫瘤的發(fā)生。Z近研究發(fā)現(xiàn), HH信號活化與組織纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。我們前期的研究結(jié)果顯示, 輸尿管梗阻或者馬兜鈴酸誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)累積過程中, HH信號均存在不同程度的活化, 同時伴有轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1的高表達(dá)。但HH信號與TGF-β1之間的相互關(guān)系及影響EMT和ECM累積的分子機制目前尚不清楚。本研究分別通過外源性重組蛋白活化HH信號和誘導(dǎo)TGF-β1高表達(dá), 人正常組織細(xì)胞并進(jìn)行藥物干預(yù), 以觀察兩者間的對話, 評價其對EMT和ECM累積的影響。
Copovidone        100mg    共聚維酮標(biāo)準(zhǔn)品
Corn Oil (AS)    8001-30-7    1g    玉米油標(biāo)準(zhǔn)品
Corticotropin    9002-60-2    5 vails    促腎上腺皮質(zhì)激素標(biāo)準(zhǔn)品
Cortisone Acetate    1950/4/4    150mg    醋酸可的松標(biāo)準(zhǔn)品
Cottonseed Oil (AS)    8001-29-4    1g    棉籽油標(biāo)準(zhǔn)品
Creatinine    60-27-5    100mg    肌酸酐標(biāo)準(zhǔn)品
Cromolyn Sodium    15826-37-6    500mg    色甘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品
Crospovidone    9003-39-8    100mg    交聯(lián)聚維酮對照品標(biāo)準(zhǔn)品
人正常組織細(xì)胞

 

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