1、 ATCC細(xì)胞在冰上預(yù)冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管。1支用來(lái)轉(zhuǎn)化樣品，1支做pUC18對(duì)照。同時(shí)將NZY+ broth培養(yǎng)基在42°C預(yù)熱。
2、 冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。融化時(shí)輕輕將細(xì)胞混勻并分裝成100ul/管。
3、 每管中加入隨試劑盒提供的4 ml b-ME（巰基乙醇）。
4、 溫和轉(zhuǎn)動(dòng)試管，將細(xì)胞在冰上放置10分鐘，每2分鐘溫和轉(zhuǎn)動(dòng)一下。
5、 每管細(xì)胞加入0.1–50 ng樣品DNA （或2 ml連接反應(yīng)物）（參見(jiàn)DNA 質(zhì)量與體積說(shuō)明。）用滅菌dH2O水按1:10稀釋對(duì)照pUC18 DNA，并取1 ml稀釋的pUC18 DNA加入轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
6、 溫和轉(zhuǎn)動(dòng)試管，并在冰上放置30分鐘。
7、 試管在42°C水浴熱激30秒。熱激時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率極度重要。
8、 試管冰浴2 分鐘。
9、 每管加入0.9 ml 預(yù)熱 （42°C） 的NZY+ 肉湯，37°C、225–250 rpm 搖床培養(yǎng)1 小時(shí)。
10、 取 200 ml轉(zhuǎn)化混和物鋪帶有相應(yīng)篩選抗生素的LB瓊脂糖平板（如果進(jìn)行顏色篩選還需加入IPTG和X-gal）。pUC18陽(yáng)性對(duì)照則取5 ml 鋪氨芐青霉素LB瓊脂糖平板。
注意：細(xì)胞經(jīng) 1000 rpm離心 10分鐘會(huì)聚集，應(yīng)將細(xì)胞沉淀用 200 *l NZY+ 肉湯重懸。如果用于鋪板的細(xì)胞 <100 ml，先將細(xì)胞加入200 ml培養(yǎng)基中，然后用滅菌涂布棒鋪板。如果采用?100 ml細(xì)胞則可以直接鋪板。傾斜涂布棒并輕輕拍打，盡量減少涂布棒上的細(xì)胞殘留。
11、 37°C培養(yǎng)過(guò)夜。顏色篩選請(qǐng)參見(jiàn)以下Blue-White Color Screening的操作指南。
12、 pUC18陽(yáng)性對(duì)照預(yù)計(jì)有約250個(gè)克隆（?5 × 109 cfu/mg pUC18 DNA）。而ATCC細(xì)胞樣品DNA的轉(zhuǎn)化效率隨DNA的量和組成（超螺旋或連接產(chǎn)物）有較大差異，大質(zhì)粒和非超螺旋DNA往往得到較少的克隆。
中藥對(duì)照藥材    鶴虱    2.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    蟾酥    0.2g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    松葉    10.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    人參蘆頭    0.5g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    廣藿香    1.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    山麥冬    1.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    山藥    2.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    山楂（山里紅）    3.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    天冬    1.0g    中藥對(duì)照藥材
中藥對(duì)照藥材    毛冬青    1.5g    中藥對(duì)照藥材
ATCC細(xì)胞