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elisa定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法雙抗體夾心法

時(shí)間:2018/3/12閱讀:257
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elisa定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法,操作步驟如下: 雙抗體夾心法
一、將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
二、加受檢標(biāo)本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間,讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
三、加酶標(biāo)抗體:使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
四、加底物:夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。
根據(jù)同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。
在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清,包被和酶標(biāo)用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng),作一步法檢測(cè)。
在一步法測(cè)定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí),過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象,此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過(guò)剩帶上)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(位于抗體過(guò)剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測(cè)讀,所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí),反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時(shí),應(yīng)注意可測(cè)范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
elisa定量檢測(cè)試劑盒角蛋白14(KRT14)ELISA試劑盒    ,英文名:    KRT14 ELISA Kit
角蛋白13(KRT13)ELISA試劑盒    ,英文名:    KRT13 ELISA Kit
角蛋白12(KRT12)ELISA試劑盒    ,英文名:    KRT12 ELISA Kit
角蛋白10(KRT10)ELISA試劑盒    ,英文名:    KRT10 ELISA Kit
角蛋白1(KRT1)ELISA試劑盒    ,英文名:    KRT1 ELISA Kit
焦磷酸酶2(PPA2)ELISA試劑盒    ,英文名:    PPA2 ELISA Kit
焦磷酸酶1(PPA1)ELISA試劑盒    ,英文名:    PPA1 ELISA Kit
膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)ELISA試劑盒    ,英文名:    GFRα1 ELISA Kit
膠質(zhì)細(xì)胞成熟因子γ(MPFγ)ELISA試劑盒    ,英文名:    MPFγ ELISA Kit
膠乳素(LXN)ELISA試劑盒    ,英文名:    LXN ELISA Kit
降鈣素受體(CTR)ELISA試劑盒    ,英文名:    CTR ELISA Kit
腱調(diào)蛋白(TNMD)ELISA試劑盒    ,英文名:    TNMD ELISA Kit
腱蛋白樣蛋白1(CHRDL1)ELISA試劑盒    ,英文名:    CHRDL1 ELISA Kit
腱蛋白(CHRD)ELISA試劑盒    ,英文名:    CHRD ELISA Kit
堿性唾液*豐富蛋白2(PRB2)ELISA試劑盒    ,英文名:    PRB2 ELISA Kit
堿性唾液*豐富蛋白1(PRB1)ELISA試劑盒    ,英文名:    PRB1 ELISA Kit
堿性神經(jīng)酰胺酶3(ACER3)ELISA試劑盒    ,英文名:    ACER3 ELISA Kit
堿性神經(jīng)酰胺酶2(ACER2)ELISA試劑盒    ,英文名:    ACER2 ELISA Kit
堿性神經(jīng)酰胺酶1(ACER1)ELISA試劑盒    ,英文名:    ACER1 ELISA Kit
堿性鞘磷脂磷酸二酯酶(Alk-Smase)ELISA試劑盒    ,英文名:    Alk-Smase ELISA Kit
堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF2 ELISA Kit
堿核蛋白2(BNC2)ELISA試劑盒    ,英文名:    BNC2 ELISA Kit
堿核蛋白1(BNC1)ELISA試劑盒    ,英文名:    BNC1 ELISA Kit
剪切修復(fù)交叉互補(bǔ)修復(fù)缺陷偶聯(lián)因子1(ERCC1)ELISA試劑盒    ,英文名:    ERCC1 ELISA Kit
剪切多聚腺苷酸化特異性因子1(CPSF1)ELISA試劑盒    ,英文名:    CPSF1 ELISA Kit
剪接因子4(SF4)ELISA試劑盒    ,英文名:    SF4 ELISA Kit
剪接因子1(SF1)ELISA試劑盒    ,英文名:    SF1 ELISA Kit
減數(shù)分裂重組蛋白5(MEI5)ELISA試劑盒    ,英文名:    MEI5 ELISA Kit
減數(shù)分裂抑制因子1(MEI1)ELISA試劑盒    ,英文名:    MEI1 ELISA Kit
監(jiān)理蛋白(SVIL)ELISA試劑盒    ,英文名:    SVIL ELISA Kit
間隙連接蛋白β1(GJβ1)ELISA試劑盒    ,英文名:    GJβ1 ELISA Kielisa定量檢測(cè)試劑盒

 

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