小鼠小梁網細胞*培養基培養說明

   暑假悄悄來到，快樂已經發酵，帶上輕松的心情，和田野來個擁抱，沒事看看藍天，和小鳥比比奔跑，沒事搞個娛樂，似魚兒開心冒泡。順便給你個信息：祝你暑假快樂哇哇叫！小編為你介紹小鼠小梁網細胞*培養基培養說明。

處理方法：

1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。

2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

3）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的*培養基。

4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的*培養基。

5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得。

培養操作流程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備F-12K培養基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換 液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。

3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。

4.移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

      1，細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。