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elisa定量檢測試劑盒使用方法有哪幾步

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elisa定量檢測試劑盒使用方法有哪幾步
1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗稀釋血清的步驟:
1、先把蛋白稀釋一定的倍數,比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個參數),將抗原進行一系列稀釋包被微量反應板
2、再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育后洗滌,再加酶結合物進行反應,經孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應后分別測定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。
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