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豚鼠絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)elisa定量檢測試劑盒 操作步驟

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豚鼠絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)elisa定量檢測試劑盒
操作步驟:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。 

(2)酶標板置4℃,包被過夜。

(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

(4)陰性對照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。 

(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 

(6)洗板,同(4)。 

(7)每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 

(9)洗板,同(4)。 

(10)每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 

(11)每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。 

(12)分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測得的od值為兩者之差(w1-w2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
 

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