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小鼠組織蛋白酶S(cath-S)試劑盒使用說明書

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                        小鼠組織蛋白酶S(cath-S)試劑盒使用說明書

 本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中組織蛋白酶 S(cath-S)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠組織蛋白酶 S(cath-S)水平。用純化的小

鼠組織蛋白酶 S(cath-S)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入

組織蛋白酶 S(cath-S),再與 HRP 標(biāo)記的組織蛋白酶 S(cath-S)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原

-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,

并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組織蛋白酶 S(cath-S)呈正相

關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠組織蛋

白酶 S(cath-S)濃度。

試劑盒組成

 

1 30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7 終止液

6ml×1 瓶

 

2 酶標(biāo)試劑

6ml×1 瓶

8 標(biāo)準(zhǔn)品(160ng/L) 0.5ml×1 瓶

 

3 酶標(biāo)包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標(biāo)本要求

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

10 說明書

11 封板膜

12 密封袋

1.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個

 

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

80 ng/L

9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40 ng/L

20 ng/L

10 ng/L

5.0 ng/L

5 號標(biāo)準(zhǔn)品

4 號標(biāo)準(zhǔn)品

3 號標(biāo)準(zhǔn)品

2 號標(biāo)準(zhǔn)品

1 號標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時

控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計

算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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