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[器材和試劑]●T4DNA連接酶及10×緩沖液（NEB）●酚/氯仿（Sigma）●和70%乙醇，-20℃保存●消化的載體和scFv文庫(kù)●TE（10mmol/LTrispH8，lmmol/LEDTA）[...
[方法]1．取適當(dāng)數(shù)量（參見(jiàn)上述討論）的甘油文庫(kù)儲(chǔ)存料接種到含有250m12×TY/amp/glu的2L培養(yǎng)錐形瓶中。培養(yǎng)基的A600值應(yīng)小于0．05。從每個(gè)培養(yǎng)瓶中取1ul鋪板確定起始接種物的細(xì)菌量...
[器材和試劑]●L8—MBeckman超速離心機(jī)或與其相當(dāng)?shù)臋C(jī)型●吊桶式SWTi4l轉(zhuǎn)頭或相當(dāng)類型●氯化銫（Sigma）●PBS●純化的噬菌體樣本[方法]1．在每毫升后的噬菌體懸液（例如來(lái)自實(shí)驗(yàn)方案1...
[方法]1．配制PCR“主混合液”，每克隆20ulPCR混合液，包含：●水，15．5ul●10XRT緩沖液，2．0ul●5mmol／LdNTP，1．0ul●5，引物，1．0ul●3，引物，1．0ul●...
[器材和試劑]●9E10單抗（SantaCruzBiotech）●PBS●PBS／0．1％Tween20（PBS／Tween）●4％MPBS●抗小鼠HRP標(biāo)記抗體（例如Sigma目錄號(hào)A2554）●含...
為便于輕鏈改組，要在FHENl—Vλ3載體中構(gòu)建輕鏈基因文庫(kù)。此載體以pHEN1為基礎(chǔ)并包含：pelB前導(dǎo)序列、1個(gè)NcoI克隆位點(diǎn)、1個(gè)多接頭、1個(gè)編碼VH框架4中2個(gè)C末端氨基酸的XhoI克隆位點(diǎn)...
[方法]1．配制4個(gè)獨(dú)立的50ulPCR反應(yīng)混合液，包含：●水，35．5ul●20XdNTP（每種5mmol／L），2．5ul●10XVent聚合酶緩沖液，5．0ul●FdSEQl引物（10pmol/...
A液（80ml）：1％氯化金，lml；雙重蒸餾水，79ml。B液（20m1）：1％檸檬酸鈉，4ml；1％單寧酸，0.lml；雙重蒸餾水，15．8ml。25mmol/LK2C03，0．1ml；將上述A液...
乙醇—超聲波還原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。（2）用0．2m01/LK2C03調(diào)pH至7．2，再加入lml無(wú)水乙醇。...
1）選擇適當(dāng)?shù)腜ipetman：不同型號(hào)的微量移液器，各有其吸取體積范圍，請(qǐng)依取用溶液體積取用適當(dāng)?shù)奈⒘恳埔浩鳌100.5~10P202~20P10020~100P20050~200P1000200...
藥品試劑：Solution1Solution2方法步驟：1）請(qǐng)取六支微量離心管，分別標(biāo)上A~F。2）以正確使用方法，依下表所列體積吸取不同溶液至各管中。單位ABCDEFSolution13008205...
吸光度測(cè)定方法1）打開(kāi)右前方之電源開(kāi)關(guān)。2）打開(kāi)左后側(cè)之UVLamp或VISLamp開(kāi)關(guān)。3）輸入波長(zhǎng)：按「WAVE-LENGTH」鍵按數(shù)值鍵，例如：「2」「8」「0」按「ENTER」鍵4）選擇MOD...
藥品試劑：E.coliK-12菌株（JM109）LBagarplates：1%（w/v）Bactotryptone,0.5%Bactoyeastextract,1%NaCl，以5NNaOH調(diào)至pH7....
方法步驟：1）進(jìn)行轉(zhuǎn)形實(shí)驗(yàn)前16~20h，自-70℃取出貯存的菌種，以劃單一菌落方式將菌株JM109接種在SOB固體培養(yǎng)基上，在37℃培養(yǎng)。2）取40mLSOB培養(yǎng)基裝入125mL已滅過(guò)菌的三角瓶（請(qǐng)...
方法步驟：菌體的處理：1）進(jìn)行轉(zhuǎn)形實(shí)驗(yàn)的前16~20h，將菌種JM109接種在SOB固體培養(yǎng)基上，并在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。34MethodsinBiotechnologyVol12）取80mLSOB培...
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