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上海金穗生物科技有限公司
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8 2013-3

scFv和載體DNA的連接

[器材和試劑]●T4DNA連接酶及10×緩沖液(NEB)●酚/氯仿(Sigma)●和70%乙醇,-20℃保存●消化的載體和scFv文庫(kù)●TE(10mmol/LTrispH8,lmmol/LEDTA)[...

6 2013-3

自文庫(kù)甘油儲(chǔ)存料中制備噬菌體抗體

[方法]1.取適當(dāng)數(shù)量(參見(jiàn)上述討論)的甘油文庫(kù)儲(chǔ)存料接種到含有250m12×TY/amp/glu的2L培養(yǎng)錐形瓶中。培養(yǎng)基的A600值應(yīng)小于0.05。從每個(gè)培養(yǎng)瓶中取1ul鋪板確定起始接種物的細(xì)菌量...

6 2013-3

用氯化銫離心法純化噬菌體

[器材和試劑]●L8—MBeckman超速離心機(jī)或與其相當(dāng)?shù)臋C(jī)型●吊桶式SWTi4l轉(zhuǎn)頭或相當(dāng)類型●氯化銫(Sigma)●PBS●純化的噬菌體樣本[方法]1.在每毫升后的噬菌體懸液(例如來(lái)自實(shí)驗(yàn)方案1...

4 2013-3

用PCR識(shí)別不同的噬菌體抗體克隆

[方法]1.配制PCR“主混合液”,每克隆20ulPCR混合液,包含:●水,15.5ul●10XRT緩沖液,2.0ul●5mmol/LdNTP,1.0ul●5,引物,1.0ul●3,引物,1.0ul●...

4 2013-3

在微量滴定板中進(jìn)行可溶性SCFv ElISA

[器材和試劑]●9E10單抗(SantaCruzBiotech)●PBS●PBS/0.1%Tween20(PBS/Tween)●4%MPBS●抗小鼠HRP標(biāo)記抗體(例如Sigma目錄號(hào)A2554)●含...

1 2013-3

構(gòu)建輕鏈改組文庫(kù)

為便于輕鏈改組,要在FHENl—Vλ3載體中構(gòu)建輕鏈基因文庫(kù)。此載體以pHEN1為基礎(chǔ)并包含:pelB前導(dǎo)序列、1個(gè)NcoI克隆位點(diǎn)、1個(gè)多接頭、1個(gè)編碼VH框架4中2個(gè)C末端氨基酸的XhoI克隆位點(diǎn)...

1 2013-3

人VL基因文庫(kù)的構(gòu)建

[方法]1.配制4個(gè)獨(dú)立的50ulPCR反應(yīng)混合液,包含:●水,35.5ul●20XdNTP(每種5mmol/L),2.5ul●10XVent聚合酶緩沖液,5.0ul●FdSEQl引物(10pmol/...

27 2013-2

鞣酸—檸檬酸鈉還原法制備膠體金分散顆粒

A液(80ml):1%氯化金,lml;雙重蒸餾水,79ml。B液(20m1):1%檸檬酸鈉,4ml;1%單寧酸,0.lml;雙重蒸餾水,15.8ml。25mmol/LK2C03,0.1ml;將上述A液...

27 2013-2

制備膠體金分散顆粒的其他方法

乙醇—超聲波還原法(Baigent和Muller,1980)(1)取1%AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。(2)用0.2m01/LK2C03調(diào)pH至7.2,再加入lml無(wú)水乙醇。...

25 2013-2

微量移液器基本使用方法

1)選擇適當(dāng)?shù)腜ipetman:不同型號(hào)的微量移液器,各有其吸取體積范圍,請(qǐng)依取用溶液體積取用適當(dāng)?shù)奈⒘恳埔浩鳌100.5~10P202~20P10020~100P20050~200P1000200...

25 2013-2

微量移液器的使用與準(zhǔn)確度檢測(cè)

藥品試劑:Solution1Solution2方法步驟:1)請(qǐng)取六支微量離心管,分別標(biāo)上A~F。2)以正確使用方法,依下表所列體積吸取不同溶液至各管中。單位ABCDEFSolution13008205...

22 2013-2

分光光度計(jì)之使用

吸光度測(cè)定方法1)打開(kāi)右前方之電源開(kāi)關(guān)。2)打開(kāi)左后側(cè)之UVLamp或VISLamp開(kāi)關(guān)。3)輸入波長(zhǎng):按「WAVE-LENGTH」鍵按數(shù)值鍵,例如:「2」「8」「0」按「ENTER」鍵4)選擇MOD...

22 2013-2

細(xì)菌培養(yǎng)之單一菌落 (single colony)分離

藥品試劑:E.coliK-12菌株(JM109)LBagarplates:1%(w/v)Bactotryptone,0.5%Bactoyeastextract,1%NaCl,以5NNaOH調(diào)至pH7....

20 2013-2

氯化鈣法進(jìn)行質(zhì)體的轉(zhuǎn)形

方法步驟:1)進(jìn)行轉(zhuǎn)形實(shí)驗(yàn)前16~20h,自-70℃取出貯存的菌種,以劃單一菌落方式將菌株JM109接種在SOB固體培養(yǎng)基上,在37℃培養(yǎng)。2)取40mLSOB培養(yǎng)基裝入125mL已滅過(guò)菌的三角瓶(請(qǐng)...

20 2013-2

電穿孔法進(jìn)行質(zhì)體的轉(zhuǎn)形

方法步驟:菌體的處理:1)進(jìn)行轉(zhuǎn)形實(shí)驗(yàn)的前16~20h,將菌種JM109接種在SOB固體培養(yǎng)基上,并在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。34MethodsinBiotechnologyVol12)取80mLSOB培...

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